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2023年11月21日 15:41 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
異硫氰酸熒光素(FITC)比羧基熒光素活性更高，羧基熒光素在使用前需要激活。FITC主要與巰基反應(yīng)，如還原型半胱氨酸的側(cè)鏈，尤其是多肽或蛋白中的氨基。
對于許多應(yīng)用來說，在化學(xué)合成過程中引入多肽熒光標(biāo)記是很容易的。例如，在固相合成過程中，F(xiàn)ITC可以與賴氨酸(Lys)或選擇性地脫保護(hù)的鳥氨酸（ornithine）側(cè)鏈，或合成過程中多肽的N端氨基發(fā)生反應(yīng)。在N端標(biāo)記時(shí)，建議在最后一個(gè)氨基與異硫氰酸酯和氨基反應(yīng)生成的硫脲鍵之間引入烷基間隔器（alkyl spacer），如氨基乙酸(Ahx)。
鏈接切割需要酸性環(huán)境，在N端標(biāo)記FITC的多肽需要環(huán)化形成熒光素，通常伴隨著最后一個(gè)氨基酸的去除。然而，當(dāng)有間隔劑時(shí)，如氨基乙酸，或當(dāng)目標(biāo)肽從樹脂通過非酸性環(huán)境切斷時(shí)，這是可以避免的。
空間位阻被認(rèn)為是在熒光染料之前使用Ahx的主要原因，而不是FITC不能直接與多肽偶聯(lián)的原因。Ahx或b-Ala可作為FITC標(biāo)記多肽的間隔物。
新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
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