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2023年12月09日 09:29 來源:新維創(chuàng)生物科技(重慶)有限公司
FITC異硫氰酸熒光素標(biāo)記蛋白/轉(zhuǎn)鐵蛋白/乳鐵蛋白/藻紅蛋白
FITC異硫氰酸熒光素,具有高吸收率、優(yōu)良的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性等特點(diǎn),是生物學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的一種綠色熒光素衍生物,其異硫氰酸基團(tuán)可與蛋白的氨基末端或者伯胺反應(yīng)從而實(shí)現(xiàn)包括抗體,凝集素在內(nèi)的蛋白標(biāo)記。除了用作蛋白質(zhì)標(biāo)記物,還可用作蛋白質(zhì)熒光示蹤劑,標(biāo)記抗體用以快速鑒定病原體,以及用于蛋白質(zhì)和多肽(HPLC)的微量測(cè)序。FITC為黃-橙色粉末,最大激發(fā)波長為494 nm。一旦激發(fā),在最大發(fā)射波長520 nm處呈黃-綠色熒光。熒光 :λex 492 nm, λem 518 nm。
溶解度:Solubility丙酮(1mg/ml);DMSO(5mg/ml);乙醇,微溶于水(<0.1mg/ml)
性狀:淺黃色至棕色固體粉末
儲(chǔ)藏條件: Storage conditions-20°C,避光,在氮?dú)庀卤4?br style="box-sizing: border-box; user-select: auto; -webkit-tap-highlight-color: transparent; color: rgb(51, 51, 51); font-family: system-ui, -apple-system, "Segoe UI", Roboto, Ubuntu, Cantarell, "Noto Sans", sans-serif, "Apple Color Emoji", "Segoe UI Emoji", "Segoe UI Symbol", "Noto Color Emoji", BlinkMacSystemFont, "Helvetica Neue", Arial, "PingFang SC", "PingFang TC", "PingFang HK", "Microsoft Yahei", "Microsoft JhengHei"; white-space: pre-wrap; background-color: rgb(255, 255, 255);"/>一、標(biāo)記蛋白
1.制備溶于0.1 M碳酸鈉緩沖液(pH 9)的待交聯(lián)蛋白樣品,濃度≥2 mg/mL。
【注意】:a)勿將碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液存放于0-5℃超過1周,其pH值會(huì)發(fā)生變化,建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
b)待標(biāo)記的蛋白必須是未被污染蛋白,且溶解蛋白的緩沖液里不能含有疊氮鈉或胺類試劑,如Tris、甘氨酸,因?yàn)檫@些試劑會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。如果緩沖液里含有上述試劑,則需將該蛋白溶液在4℃下于PBS,pH 7.4 透析過夜;透析過程中如果pH值過高(>8.0-8.5)會(huì)損害某些蛋白。
2. 溶解FITC于無水DMSO配制成濃度為1 mg/mL的溶液。
【注意】:于標(biāo)記實(shí)驗(yàn)前新鮮配置FITC溶液,避光。
3. 對(duì)于1 mL 蛋白溶液加入50 μLFITC溶液,可按照每次5 μL的量邊加邊輕輕攪拌蛋白溶液;
4. 待所需FITC加入完畢,將反應(yīng)液于4℃避光孵育8 h;
5. 加入NH4Cl使其終濃度至50 mM,4℃終止反應(yīng)2 h;
6. 加入二甲苯青至濃度0.1%,甘油至濃度5%;
7. 通過大小孔徑合適的凝膠過濾層析分離排除未被結(jié)合的FITC,分離范圍在20,000至50,000(球蛋白例如抗體)。待凝膠柱平衡后,將以上反應(yīng)混合液從柱頂注入,打開凝膠柱,待其全部流入柱床后,加入PBS緩沖液。
此時(shí),可以形成兩條帶:a,快速移動(dòng)帶,也就是FITC-蛋白偶聯(lián)物,先被洗脫,通常于室內(nèi)光下可看到;b,慢速移動(dòng)帶,也就是未結(jié)合蛋白的FITC和二甲苯青。僅僅在PBS緩沖液清洗后被洗脫出來。
8. 于4℃避光儲(chǔ)存上述偶聯(lián)物,加入0.1%(w/v)疊氮化鈉作為一種防腐劑。若蛋白濃度較低(<1 mg/mL),可加入1%BSA作為一種蛋白穩(wěn)定劑。
9. 偶聯(lián)物中熒光素和蛋白的比值(F/P)可通過測(cè)定495 nm和280 nm處的吸光值來鑒定,F(xiàn)/P應(yīng)位于0.3-1.0。小于該比例則信號(hào)太低,高于該比例則背景太高
以上操作流程僅供參考,具體根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定,可提供多種熒光標(biāo)記蛋白,現(xiàn)貨供應(yīng),品質(zhì)高價(jià)格低。撥打銷售熱線了解更多優(yōu)惠:17725097785
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