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2024年01月25日 10:25 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
在流式細胞術的細胞免疫學檢測及免疫分型等實驗中，各種熒光素偶聯(lián)的抗體是必不可少的。熒光素的選擇和搭配，通常會從以下5個方面進行考慮：
1、流式細胞儀的配置：儀器需配備可激發(fā)相應熒光素的激光管；對于多熒光素實驗，儀器可同時檢測多種細胞熒光。
2、染料的亮度與抗原表達量相適應：低表達量的抗原，推薦使用高亮度熒光素；高表達量的抗原，推薦使用低亮度熒光素。
3、熒光素之間的光譜重疊最小化：盡量選擇光譜重疊小的熒光素組合，如FITC/PE-Cy7；選擇不同激光激發(fā)的熒光素組合，如FITC/APC、PE/APC。
4、避免復合染料聯(lián)合使用帶來的假陽性：常見的復合染料有PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy7等，復合染料的信號衰退會降低APC或PE的靈敏度。如果出現(xiàn)信號衰退，則：
● 減少樣本暴露于光、高溫或固定劑；
● 選擇染料時考慮：復合染料的信號衰退會降低APC或PE的靈敏度，避免染料和其衍生物在同一細胞上標記。選擇更穩(wěn)定的tandem-dye（PerCp-Cy5.5）
● 如果樣本需固定，選擇穩(wěn)定、可有效阻止復合染料信號衰退的固定劑多聚甲醛：冰上固定10min，離心除去多聚甲醛，將樣品重懸于PBS中。
5、盡量使用紅色激光激發(fā)自發(fā)熒光高的樣本：每種細胞群都有不同水平的自發(fā)熒光。所有的熒光通道均可觀察到自發(fā)熒光，但自發(fā)熒光強度在波長較長時迅速降低。對自發(fā)熒光較強的細胞，選擇紅光激發(fā)，發(fā)射波長長的熒光素（如APC）可得到較好的S/N比值；對自發(fā)熒光比較弱的細胞，發(fā)射波長長的熒光素對S/N提高沒有明顯的改善，可選用FITC。
希望上面這些知識可以更好地幫助您選擇熒光素新維創(chuàng)生物是熒光染料源頭廠家，種類豐富價格優(yōu)惠性價比高，流式細胞術對熒光素的選擇搭配有著很高的要求，尤其是對于多色實驗來說，熒光素搭配效果直接影響到檢測效果。
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