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2024年02月07日 09:53 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
熒光染料可對(duì)蛋白質(zhì)、核酸和聚糖等其他結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色，即便鈣離子等非生物物質(zhì)也可以檢測(cè)出來。利用熒光物質(zhì)與相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生特異性結(jié)合后，可對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定位、定性和定量的分析，此方法具有高度特異性、敏感性和直觀性，是最早出現(xiàn)的免疫標(biāo)記技術(shù)。
當(dāng)熒光物質(zhì)吸收激發(fā)光的能量后，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回復(fù)至基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光形式釋放出能量，稱為熒光。其特點(diǎn)為在接受能量后即可引起發(fā)光，而一旦停止供能后，熒光隨之瞬間消失。
異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機(jī)熒光染料，發(fā)射波長(zhǎng)為520 nm的熒光染料，是目前最常用的熒光標(biāo)志物；它的激發(fā)波長(zhǎng)接近488 nm，光量子得率高，但受pH影響較大。目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。
在 495/517 nm 處，該染料會(huì)產(chǎn)生激發(fā)/發(fā)射峰值，并可借助異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)與不同抗體結(jié)合，該基團(tuán)可以和蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團(tuán)相結(jié)合。而它的基本成分—— 熒光素，其摩爾質(zhì)量為 332 g/mol，常被用作熒光示蹤劑。FITC(389 g/mol) 是用于熒光顯微鏡技術(shù)的首批染料，且其被當(dāng)成 Alexa Fluor?488 等后續(xù)熒光染料的發(fā)端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統(tǒng)，而該系統(tǒng)受藍(lán)色光譜中的光所激發(fā)。
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