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2024年02月07日 10:31 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
在熒光顯微鏡技術(shù)中，可以通過兩種方式觀察到你的目的蛋白：利用內(nèi)源熒光信號，即通過克隆手段，用遺傳學(xué)方法將熒光蛋白與目的蛋白相連；或利用熒光標(biāo)記的抗體特異性結(jié)合目的蛋白。有些生物學(xué)問題采用第二種方法會更有用或更有必要。比如，組織學(xué)樣品無法使用熒光蛋白，因為通常來說，標(biāo)本都是從無法保存熒光蛋白的生物體中獲取。此外，當(dāng)有一個有功能的抗體可用時，免疫熒光法會比熒光蛋白技術(shù)快很多，因為后者必須先克隆目的基因再將DNA轉(zhuǎn)染到適當(dāng)?shù)募?xì)胞中。
熒光蛋白的另一項劣勢在于其本身屬于蛋白質(zhì)。因此，細(xì)胞內(nèi)的這些熒光蛋白具有特定的蛋白質(zhì)特性，其會導(dǎo)致附著的目的蛋白質(zhì)發(fā)生功能紊亂或出現(xiàn)誤釋的情況。然而，熒光蛋白技術(shù)仍然是觀察活細(xì)胞的首選方法。
免疫熒光法利用了抗體可以和相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的這個特性，對此它還有兩種不同的表現(xiàn)形式。最簡單的方式是使用可與目的蛋白相結(jié)合的熒光標(biāo)記抗體。這種方法被稱為“直接免疫熒光法”。
在很多情況下，我們可以利用兩種不同特性的抗體。第一種抗體可以結(jié)合目的蛋白，但其本身并未進(jìn)行熒光標(biāo)記（一抗）。第二種抗體本身就攜帶熒光染料（二抗），并且可以特異性結(jié)合一抗。這種方法被稱為“間接免疫熒光法”。這種方法存在諸多優(yōu)勢。一方面，它會產(chǎn)生放大效應(yīng)，因為不只一個二抗可以與一抗相結(jié)合。
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