DiR(細(xì)胞膜深紅色熒光探針)親脂性熒光染料使用方法CAS號：100068-60-8

產(chǎn)品名稱：DiR(細(xì)胞膜深紅色熒光探針)

英文名稱：DiR

分子式： C63H101IN2 

分子量：1013.4

CAS號：100068-60-8

EX/EM:748nm/780nm

溶劑：DMSO

保存條件：2-8℃干燥避光保存，長期保存建議零下 20℃ 

染料 DiR, DiO, DiD 和DiI是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱)結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其最佳濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞染色。 
它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用，其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常卓越的替代品。 
DiR在活體成像或者示蹤中非常有用，因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。

使用方法：
1.DiD，DiO，DiI，DiR細(xì)胞膜染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
注意：未使用的儲存液保存在-20 oC，避免反復(fù)凍融。
(2)工作液制備：用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件。
2.懸浮細(xì)胞染色
(1)懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
(3)染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
(4)傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。
(5)重復(fù)(3)，(4)步驟兩次以上。
3.粘壁細(xì)胞的染色
(1)使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。
(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
(4)在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
(5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。
4.流式細(xì)胞儀的檢測
DiO、DiI、DiD、DiR染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。

檢測條件：
(1) DiR工作液濃度：5μM

(2) 染色條件：貼壁細(xì)胞：37 ℃染色工作液孵育細(xì)胞20分鐘，用培養(yǎng)液洗2次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)10分鐘。 懸浮細(xì)胞：37 ℃染色工作液孵育細(xì)胞20分鐘，1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘，傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液，重復(fù)兩次。

(3) 檢測儀器：小動(dòng)物活體成像儀（VILBER, FUSION FX）；Ex/Em=750/850nm