新維創(chuàng)生物液體核磁共振氫譜檢測(cè)操作過程

    液體核磁共振氫譜檢測(cè)的基本操作包括樣品的準(zhǔn)備、檢測(cè)前儀器的調(diào)試、實(shí)驗(yàn)參數(shù)的設(shè)定鎖場、調(diào)諧、勻場、數(shù)據(jù)采集和處理等幾個(gè)步驟。新維創(chuàng)生物溫馨提示：在進(jìn)行核磁共振氫譜檢測(cè)時(shí)，禁止攜帶磁性卡、金屬物品(如機(jī)械手表、鋼瓶、鉗子等)以及安裝有心臟起搏器者進(jìn)入檢測(cè)區(qū)域，以避免造成不必要的人身危險(xiǎn)和財(cái)產(chǎn)損失。

第一步：樣品的準(zhǔn)備

  做核磁共振氫譜檢測(cè)所需樣品要比較純，一般情況下純度要求達(dá)到95%以上。為了得到分辨率很高的圖譜，應(yīng)將樣品用溶劑溶解。溶液的濃度視儀器的靈敏度、化合物的分子量以及所測(cè)核磁共振圖譜的類型而定。樣品在氘代溶劑中應(yīng)有較好的溶解性和穩(wěn)定性，用于檢測(cè)的樣品溶液中應(yīng)避免有懸浮物和順磁性物質(zhì)(如Fe3+、Cu2+等)。核磁管中的樣品溶液應(yīng)保持一定高度以滿足檢測(cè)要求，通常高度為4～5cm。由于核磁共振氫譜檢測(cè)的是樣品分子中的氫原子核，因此做核磁共振圖譜測(cè)試所用溶劑本身最好不含氫，含氫的溶劑應(yīng)是重氫試劑。常用的溶劑有：CDCl3、D2O、DMSO-d6、CD3COCD3、CD3OD、C6D6、C5D5N、CD3CN等。

第二步：檢測(cè)前儀器調(diào)試

  檢測(cè)前應(yīng)檢查所有與儀器相關(guān)的電源和供氣系統(tǒng)是否處于打開狀態(tài)。磁體中的液氮、液氦液面高度處于安全范圍。檢查儀器的溫度控制系統(tǒng)，特別是探頭的溫度控制能夠滿足檢測(cè)需求。 

第三步：檢測(cè)參數(shù)的設(shè)定

  將樣品放入磁體后選擇需要檢測(cè)的一維(如1H或13C)或二維檢測(cè)，每一個(gè)核磁都有相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)脈沖序列所對(duì)應(yīng)。應(yīng)根據(jù)需要調(diào)整檢測(cè)譜圖寬度、掃描次數(shù)、相循環(huán)次數(shù)、弛豫時(shí)間、接收機(jī)增益值等重要參數(shù)。

第四步：鎖場

  為了保證磁體所提供的靜磁場頻率不產(chǎn)生漂移，探頭通過鎖場通道不斷發(fā)射共振頻率來激發(fā)氘代溶劑產(chǎn)生氘信號(hào)，通過對(duì)氘信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)實(shí)現(xiàn)對(duì)磁體頻率漂移的補(bǔ)償。應(yīng)根據(jù)不同氘代溶劑選擇相應(yīng)的鎖場參數(shù)，通常儀器工作站軟件會(huì)提供一個(gè)觀察氘信號(hào)的窗口。

第五步：調(diào)諧

  通過對(duì)探頭進(jìn)行諧振調(diào)諧(tuning)和阻抗匹配調(diào)節(jié)(matching)，實(shí)現(xiàn)諧振回路中諧振頻率與譜儀發(fā)射到探頭上的脈沖頻率完全一致，使探頭能夠接收所有的發(fā)射功率，從而獲得較好的信噪比。一般儀器工作站軟件會(huì)提供一個(gè)調(diào)諧窗口，通過“V”字形曲線左右和上下移動(dòng)進(jìn)行諧振調(diào)諧和阻抗匹配調(diào)節(jié)。

第六步：勻場

  調(diào)節(jié)勻場線圈中X,Y,Z,Z2,XY,XZ,YZ等不同方向的磁場梯度來補(bǔ)償靜磁場的不均勻性，從而獲得分辨和靈敏度均滿意的測(cè)試結(jié)果。

第七步：數(shù)據(jù)采集和處理

  儀器采集到的正常核磁共振信號(hào)是以指數(shù)形式衰減的自由衰減信號(hào)(FID)，自由衰減信號(hào)是一種時(shí)域信號(hào)，通過傅里葉變換(FT)可以將時(shí)域信號(hào)轉(zhuǎn)換成頻域信號(hào)用于結(jié)構(gòu)分析。數(shù)據(jù)處理過程包括傅里葉變換、相位調(diào)整、化學(xué)位移定標(biāo)、標(biāo)峰，一維核磁共振氫譜圖的處理還包括積分過程。

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