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2024年07月10日 10:14 來源：http://www.yctengfei.cn/
辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以最常用。HRP廣泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個同工酶組成，分子量為40,000，等電點為pH3～9，酶催化的最適pH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以O(shè)D403nm /OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的純度。高純度的酶RZ值應(yīng)在3.0左右（最高可達(dá)3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。（一般我們選擇的時候，RZ值越大越好，同等條件下催化能力越強(qiáng)。）HRP的同工酶含糖量低的堿性(PI>11)同工酶。酶免疫試驗中所使用的HRP，以PI為8.7～9.0的所謂“C”同工酶為主要組成成分，其他同工酶的活性則很低。“C”同工酶的共價結(jié)構(gòu)由2個密切接近的區(qū)域組成，血紅素基團(tuán)則位于其間而成夾心結(jié)構(gòu)，糖鏈以8個不同的部位結(jié)合于多肽。天然的酶所帶的純電荷極少；無游離的?！被?，僅有2個可測出的組氨酸，6個賴氨酸似乎全被糖鏈外殼所遮蓋。因此，HRP一般僅有1～2個可用于偶聯(lián)的氨基。
這里所說的小分子指的是一些相對分子量小于10KD的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，一般采取競爭法，這些小分子半抗原一般都會被修飾帶有羧基的碳鏈，這種情況下，就采用EDC、NHS偶聯(lián) ，但是由于HRP上面可用氨基只有1-2個。偶聯(lián)效率相對比較低，所以需要選擇RZ值高的HRP酶。如果能改造以下HRP酶，多修飾幾個賴氨酸上去，偶聯(lián)效率會提高很多，且偶聯(lián)后不會改變HRP酶的空間構(gòu)想。而且由于很多小分子的溶解性不一樣，會用到DMSO，此時需要考慮溶劑含量對HRP酶活性的影響。
HPR-Alkyne 辣根過氧化物酶-炔基
HPR-CHO 辣根過氧化物酶-醛基
HPE-NHS 辣根過氧化物酶-活化酯
HPR-Streptavidin 辣根過氧化物酶-鏈霉親和素
β-Cyclodextrin-MAL β-環(huán)糊精-MAL
Biotin-Lycorine 鹽酸石蒜堿標(biāo)記生物素
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