流式細(xì)胞術(shù)的染料分享FITC/藻紅蛋白激發(fā)波長(zhǎng)為 488nm 的熒光素

熒光素按激發(fā)光波長(zhǎng)來(lái)分，主要是激發(fā)波長(zhǎng)為375 nm、405 nm、488 nm和633 nm 4類，其中，常用的是激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm和633 nm的熒光素，如FITC、PE、APC、PI等

激發(fā)波長(zhǎng)為 488nm 的熒光素

異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）FITC是應(yīng)用最為廣泛的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，最大發(fā)射波長(zhǎng)為525 nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。

Alexa Fluor 488：Alexa Fluor是美國(guó)分子探針公司開發(fā)的系列熒光染料，Alexa Fluor 488的發(fā)射光譜與FITC幾乎一致，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出綠色熒光，最大發(fā)射波長(zhǎng)為519 nm，但其熒光強(qiáng)度和穩(wěn)定性要優(yōu)于FITC。一般來(lái)說，Alexa Fluor 488在pH 4-10范圍內(nèi)能保持較好的光穩(wěn)定性。

藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）PE是從紅藻中分離純化獲得的一種常見染料，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出橙黃色熒光，最大發(fā)射波長(zhǎng)為575 nm。PE具有吸光性能好和光量子產(chǎn)率高的特點(diǎn)，可用于標(biāo)記表達(dá)水平較低的蛋白。在流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中，PE標(biāo)記的抗體適用于所有配備488 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀。

PE-Cy5 PE-Cy5是一種復(fù)合染料，屬于藻紅蛋白偶聯(lián)物，在此類復(fù)合染料中，激發(fā)能量可從PE傳遞到Cy5上，最大發(fā)射波長(zhǎng)為667 nm。由于PE-Cy5與FITC、PE在光譜上重疊范圍較少，熒光干擾少，因此實(shí)驗(yàn)中常將PE-Cy5與FITC、PE搭配使用。需注意，PE-Cy5不適合與APC搭配使用，兩者熒光重疊大。

PE-Cy5.5：PE-Cy5.5也是一種復(fù)合染料，能量從PE傳遞到Cy5.5上，最大發(fā)射波長(zhǎng)為694 nm。同PE-Cy5不一樣，PE-Cy5.5與FITC、PE、APC間熒光干擾小，可搭配使用，且其熒光強(qiáng)度要優(yōu)于PE-Cy5。

PE-Cy7復(fù)合染料，最大發(fā)射波長(zhǎng)為785 nm。PE-Cy7與FITC無(wú)光譜重疊，與APC重疊也較少，因此其可與FITC、PE、APC搭配使用。在實(shí)驗(yàn)中需要注意，PE-Cy7的光淬滅性很強(qiáng)，需要絕對(duì)避光環(huán)境。

PerCP-Cy5.5復(fù)合染料，最大發(fā)射波長(zhǎng)為695 nm。與PerCP相反，PerCP的光量子產(chǎn)率較低，適用于表達(dá)水平較高物質(zhì)的檢測(cè)，PerCP-Cy5.5光量子產(chǎn)率高，可用于表達(dá)水平較低物質(zhì)的檢測(cè)。在雙激光管儀器上與APC共同檢測(cè)時(shí)，需要做補(bǔ)償調(diào)節(jié)，但比PerCP補(bǔ)償少。

PI/7-AAD：碘化丙啶（propidium iodide，PI）和7-AAD（7-amino-actinomycin D）的最大發(fā)射波長(zhǎng)分別為617 nm和647 nm，是常見的熒光染料，常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，可用于鑒別死、活細(xì)胞。在大部分流式細(xì)胞儀上，PI在FL2或FL3通道檢測(cè)，7-AAD在FL3通道檢測(cè)。7-AAD同PI 有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品。