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2023年09月15日 11:53 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
熒光染料的原理
熒光染料 的一個(gè)基本原理是在熒光劑的幫助下對(duì)細(xì)胞成分進(jìn)行高度特異性的可視化。這可以是一種熒光蛋白——例如 GFP——在基因上與感興趣的蛋白質(zhì)相關(guān)聯(lián)。如果克隆是不可能的——例如在組織學(xué)樣本中——使用免疫熒光染色等技術(shù)來可視化感興趣的蛋白質(zhì)。為此，使用與不同熒光染料連接并直接或間接與適當(dāng)目標(biāo)結(jié)構(gòu)結(jié)合的抗體。在熒光染料的幫助下，熒光顯微鏡不僅限于蛋白質(zhì)，還可用于檢測(cè)核酸、聚糖和其他結(jié)構(gòu)。您甚至可以使用特定應(yīng)用的各種活細(xì)胞染料，這些染料允許使用細(xì)胞器選擇性染色（例如 ER、線粒體、高爾基體）或功能測(cè)定（例如，例如活細(xì)胞追蹤、標(biāo)記、細(xì)胞增殖或活死細(xì)胞測(cè)定，其中熒光是讀出方式。甚至可以檢測(cè)到鈣離子等非生物物質(zhì)。在熒光顯示過程中，有兩種方法可以顯示您感興趣的蛋白質(zhì)。要么借助內(nèi)在熒光信號(hào)——通過將熒光蛋白與靶蛋白進(jìn)行基因連接——要么借助與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的熒光標(biāo)記抗體。對(duì)于一些生物學(xué)問題，執(zhí)行后一個(gè)問題更有用甚至是必要的。例如，在組織學(xué)樣本的情況下，不可能使用熒光蛋白，因?yàn)橥ǔ颖緛碜圆缓腥魏螣晒獾鞍椎纳矬w。此外，如果有功能性抗體可用，免疫熒光比熒光蛋白技術(shù)快得多，在熒光蛋白技術(shù)中，您必須克隆感興趣的基因并將 DNA 轉(zhuǎn)染到足夠的細(xì)胞中。熒光蛋白的另一個(gè)缺點(diǎn)在于它們本身就是蛋白質(zhì)的性質(zhì)。有了它，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)具有特定的蛋白質(zhì)特征，這可能導(dǎo)致功能障礙或?qū)λ街母信d趣蛋白質(zhì)的誤解。然而，應(yīng)該考慮使用熒光蛋白通常是研究活細(xì)胞的首選方法。
免疫熒光利用抗體對(duì)其抗原的非常特異性的結(jié)合親和力。這可以有兩種不同的外觀。最簡(jiǎn)單的方法是使用一種與感興趣的蛋白質(zhì)結(jié)合的熒光標(biāo)記抗體。這稱為直接免疫熒光。
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