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2023年09月27日 17:54 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
熒光主要的激發(fā)光與發(fā)射光譜主峰之間的差異稱為stokes shift（斯托克位移）, 常見的stokes shift不超過幾十納米。實(shí)驗(yàn)中分子發(fā)熒光：先要吸收光能，使電子躍遷到較高能級或激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子釋放部分或全部光能時(shí)，就會(huì)發(fā)出熒光。失去的激發(fā)能是非輻射性的，失去的能量低于吸收的能量。
新維創(chuàng)生物提供花菁染料、羅丹明、BDP、熒光素、近紅外一區(qū)/二區(qū)染料、熒光探針、熒光標(biāo)記蛋白/糖等。我們一起來選擇合適的熒光染料：
1、 確定熒光染料本身所適合的流式細(xì)胞儀，需要了解染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長、儀器所配制的檢測濾光片和激發(fā)光源。
2、 了解熒光素的相對熒光強(qiáng)度：相對熒光強(qiáng)度反映的是熒光素-單抗結(jié)合物的亮度，其判斷標(biāo)準(zhǔn)是染色指數(shù)。
影響相對熒光強(qiáng)度的因素包括：不同儀器的激光及濾片組合不同，熒光素的相對熒光強(qiáng)度不同；抗體上熒光素分子的多少會(huì)影響相對的熒光強(qiáng)度。
3、 選擇原則：
（1） 考慮抗原的密度：高密度表達(dá)的抗原可考慮選擇幾乎所有的熒光素；低密度表達(dá)的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素，如PE/APC。；
（2） 自發(fā)熒光：每種細(xì)胞群都有不同水平的自發(fā)熒光，所有的熒光通道均可觀察的自發(fā)熒光，但自發(fā)熒光強(qiáng)度在波長較長時(shí)迅速降低。對自發(fā)熒光較強(qiáng)的細(xì)胞，選擇發(fā)射波長長的熒光素（APC）可得到較好的S/N比值，對于自發(fā)熒光強(qiáng)度弱的細(xì)胞，發(fā)射波長長的熒光素對S/N提高沒有明顯的改善，可選用FITC。
（3） 非特異性結(jié)合復(fù)合染料：避免信號衰退。復(fù)合染料因?yàn)楣?、固定劑或溫度升高?huì)導(dǎo)致信號衰退，使復(fù)合染料在上一級染料處發(fā)光。
減少樣本暴露于光、高溫或固定劑，可很大程度上避免這一問題。若樣本需要固定，要選擇穩(wěn)定的固定劑，可有效阻止復(fù)合染料的信號衰退。盡量減少信號間的干擾，檢測的顏色越多，面臨的信號干擾越多，選擇試劑時(shí)盡可能降低熒光發(fā)射波長間的重疊。
新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
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