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2023年10月11日 14:08 來源:新維創(chuàng)生物科技(重慶)有限公司
中文名稱:熒光素標(biāo)記鬼筆環(huán)肽
英文名稱:Fluorescein-Phalloidin
CAS號(hào):84313-38-2
分子式:C56H60N10O15S2
分子量:1177.27
熒光素-鬼筆環(huán)肽(Fluorescein Phalloidin)的應(yīng)用:
熒光素鬼筆環(huán)肽復(fù)合物可用于可視化和定量組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞制備物中的 F-actin 肌動(dòng)蛋白。熒光素鬼筆環(huán)肽復(fù)合物完全兼容細(xì)胞分析過程使用的其他熒光染色劑,包括熒光蛋白、Qdot? 納米晶體和 Alexa Fluor? 偶聯(lián)物(包括二抗)。
熒光素-鬼筆環(huán)肽(Fluorescein Phalloidin)的使用方法:
一、制備 1× Fluorescein Phalloidin 工作溶液:
在含有 1% BSA 的 1 mL PBS 中加入 1 μL 的 1000× 熒光素鬼筆環(huán)肽 DMSO 溶液。
注意:
1. 不同的細(xì)胞類型可能會(huì)有不同的染色。熒光素鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度應(yīng)相應(yīng)配制。
2. 1% 牛血清白蛋白 (BSA) 用于減少非特異性背景染色。
二、染色細(xì)胞:
1. 用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次。在室溫下將細(xì)胞固定在 PBS 中的 3.7% 無甲醇甲醛溶液中 10-30 分鐘。
注意:避免使用任何含有甲醇的固定劑,因?yàn)榧状紩?huì)在固定過程中破壞肌動(dòng)蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。
2. 用 PBS 清洗固定的細(xì)胞 2-3 次。
3. 可選:將 PBS 中的 0.1% Triton X-100 添加到固定細(xì)胞中 3-5 分鐘以增加滲透性。在 PBS 中清洗細(xì)胞 2-3 次。
4. 將熒光素鬼筆環(huán)肽工作液100 μL/孔(96孔板)加入固定的細(xì)胞中,室溫染色20~90分鐘。
5. 用 PBS 輕輕沖洗細(xì)胞 2-3 次,以去除多余的熒光素鬼筆環(huán)肽。
6. 在所需的 Ex/Em 波長下運(yùn)行熒光顯微鏡或其他設(shè)備(熒光素鬼筆環(huán)肽,Ex/Em=497/516 nm)。
熒光素-鬼筆環(huán)肽結(jié)構(gòu)式:
熒光素-鬼筆環(huán)肽熒光圖譜:
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1. 避光保存,避免反復(fù)凍融,可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲(chǔ)存于無霜冰箱。
2. 在4℃條件下、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),使用前可以20-25℃水浴片1-5分鐘至全融解后使用。對(duì)于微量的液體,使用前需要離心數(shù)秒鐘后,使液體充分沉降到管底;
3. 本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!
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