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2023年10月18日 18:38 來源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
1將50mg amino-dextran 溶于 500 L的 PBS 中，將 dextran 溶液轉(zhuǎn)移到反應(yīng)小管中，用試劑檢測(cè)溶液 pH 值，以確保其為 pH - 7.4。
2根據(jù)染料/dextran標(biāo)記摩爾比例，取準(zhǔn)確體積的染料母液，補(bǔ)加DMF至250pL，與上述21步驟1中dextran 溶液混合，用移液器上下輕輕打動(dòng)混勻，或者輕微超聲 1-2秒，使染料完全溶解。常溫下靜置或翹班搖床輕微晃動(dòng)(更佳)，避光反應(yīng) 1-5小時(shí)，反應(yīng)時(shí)間延長有助于提高標(biāo)記效率，可標(biāo)記過夜。注意: 對(duì)于蛋白質(zhì)等敏感材料，反應(yīng)中的有機(jī)溶劑體積比最好控制在 5%以下，不建議超過 10%，反應(yīng)時(shí)間也可視情況縮短。
3利用透析法，除去未標(biāo)記的游離染料分子。透析前需對(duì)反應(yīng)樣品進(jìn)行預(yù)處理: 加入 15 m的 PBS 或者去離子水，反應(yīng)會(huì)出現(xiàn)沉淀，該沉淀為游離的羅丹明染料，加水后因?yàn)樗苄圆蛔愣恋沓鰜恚鴺?biāo)記產(chǎn)物 Rhod-dextran 水溶性強(qiáng)不會(huì)析出。10,000g 高速離心后取上清加入透析袋中透析。為了快速的透出染料分子，請(qǐng)采用至少截留分子量 >10KDa的透析袋常溫透析，最好每4個(gè)小時(shí)更換透析液，重復(fù)更換3次。隨著透析袋內(nèi) DMF溶劑分子的透出，可能會(huì)有更多的游離羅丹明染料分子沉淀出來，離心取上清換透析袋再透析，直到樣品沒有沉淀、無染料透出為止。凝膠過濾法，比如除鹽柱，也可以純化標(biāo)記產(chǎn)物，這個(gè)方法比較快捷，但是效率可能會(huì)不如透析法。
4在避光條件下，將純化后的 dextran 樣品儲(chǔ)存在4℃冰箱，可至1個(gè)月?；蛘叻?20℃冰箱，長期保存。
日期：2023-10-18
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