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2023年11月20日 11:08 來(lái)源：新維創(chuàng)生物科技（重慶）有限公司
蛋白氨基反應(yīng)，伯胺 (-NH2) 存在于每條多肽鏈的 N-末端 (稱為 α-氨基) 以及賴氨酸殘基的側(cè)鏈中(稱為 ε-氨基)。由于伯胺在生理?xiàng)l件下帶正電荷，因此它通常朝外，使得其更易于偶聯(lián)而不會(huì)使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變。從我們的表中可以看出，許多反應(yīng)基團(tuán)均可以和伯胺基結(jié)合，而在熒光標(biāo)記中，最常用的是還是 NHS 活化酯 (SE)。
NHS 活化酯 (SE)NHS，全稱為 N -羥基琥珀酰亞胺酯，是 EDC (碳二亞胺) 活化羧酸分子形成的反應(yīng)基團(tuán)。帶有活化的 NHS 酯的交聯(lián)劑 和標(biāo)記化合物在弱堿性條件下與伯胺反應(yīng)， 產(chǎn)生穩(wěn)定的酰胺鍵 。該反應(yīng)釋放 N-羥 基琥珀酰亞胺 (NHS)，可通過(guò)透析或脫鹽輕易去除。
(R)表示具有 NHS 反應(yīng)基團(tuán)的標(biāo)記試劑或交聯(lián)劑的一端; (P) 表示含有靶標(biāo)功能基團(tuán) (即氨基，–NH) 的蛋白質(zhì)或其他分子。
蛋白巰基反應(yīng)，巰基 (-SH) 存在于半胱氨酸的側(cè)鏈中。在進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)時(shí)，必須將其還原成巰基，使其可以與大多數(shù)類型的反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行交聯(lián)。巰基對(duì)馬來(lái)酰亞胺、鹵代乙?；瓦拎ざ€基具有反應(yīng)活性，在蛋白巰基標(biāo)記中，馬來(lái)酰亞胺的熒光探針最為常見(jiàn)。
馬來(lái)酰亞胺（Maleimides） 馬來(lái)酰亞胺是一種非常常用的反應(yīng)活化基團(tuán)，當(dāng)反應(yīng)混合物的 pH 值在 6.5-7.5 之間時(shí)，馬來(lái)酰亞氨基團(tuán)會(huì)與巰基基團(tuán)特異性反應(yīng)，形成不可逆的穩(wěn)定硫醚鍵。在堿性更強(qiáng)的條件下（pH>8.5），支持伯胺偶聯(lián)，并且還會(huì)增加馬來(lái)酰亞氨基團(tuán)水解成非反應(yīng)性馬來(lái)酰胺酸的速率。馬來(lái)酰亞胺不與酪氨酸、組氨酸或蛋氨酸反應(yīng)。需要注意的是，馬來(lái)酰亞胺酯是一種非活化染料，使用帶有馬來(lái)酰亞胺酯的熒光探針時(shí)，需用 DTT 活化后方可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記。
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(R) 表示具有馬來(lái)酰亞胺反 應(yīng)基團(tuán)的標(biāo)記試劑或交聯(lián)劑的一端; (P) 表示含有靶標(biāo)功能基團(tuán) (即巰基，– SH) 的蛋白質(zhì)或其他分子。
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